自身免疫病是一類由機(jī)體免疫系統(tǒng)異常活化攻擊自身組織引發(fā)的慢性疾病，包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、干燥綜合征（SS）等，其診斷與病情監(jiān)測高度依賴自身抗體檢測。目前，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）因特異性高、成本可控等優(yōu)勢，成為自身抗體檢測的主流技術(shù)，而酶標(biāo)儀作為ELISA的核心檢測設(shè)備，其光學(xué)性能、溫控精度及數(shù)據(jù)穩(wěn)定性直接決定檢測結(jié)果的可靠性。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)儀器

1、測試儀器：博清生物酶標(biāo)儀。

2、對照儀器：某品牌酶標(biāo)儀。

（二）實(shí)驗(yàn)試劑與樣本

1、試劑：ANA、抗CCP、抗SSA、抗dsDNA ELISA 檢測試劑盒，試劑均在有效期內(nèi)，嚴(yán)格按照說明書配制。

2、樣本：選取某風(fēng)濕免疫科就診患者240例（RA100例、SLE80例、SS60例），均符合國際通用診斷標(biāo)準(zhǔn)；健康對照者100例，來自某體檢中心，排除自身免疫病及其他慢性疾病。所有樣本均采集靜脈血5mL，離心分離血清（3000r/min，10min），-20℃保存，避免反復(fù)凍融，檢測前室溫復(fù)融并充分混勻。

（三）實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣本處理：將所有血清樣本按照1:100稀釋（試劑盒推薦比例），每樣本設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。

2、ELISA 操作：嚴(yán)格遵循試劑盒說明書，依次完成加樣（100μL/孔）、37℃孵育60min、洗滌液洗滌3次（300μL/孔，每次浸泡30s）、加酶標(biāo)二抗（100μL/孔）、37℃孵育30 min、再次洗滌3次、加底物液（100μL/孔）、37℃避光顯色15 min、加終止液（50μL/孔）。

3、酶標(biāo)儀檢測：分別使用博清生物酶標(biāo)儀與對照儀器，在試劑盒推薦波長（ANA：450nm/630nm，抗CCP：450nm/630nm，抗 SSA：405nm/630nm，抗dsDNA：450nm/630nm）下檢測吸光度值（A值），記錄數(shù)據(jù)并通過儀器自帶軟件計(jì)算樣本濃度及陽性判定結(jié)果（以A值≥cut-off值為陽性）。

（四）性能評估指標(biāo)

1、準(zhǔn)確性：計(jì)算兩種儀器檢測同一批樣本（n=40）的A值相關(guān)性（Pearson相關(guān)系數(shù)），并以臨床診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算兩種儀器的檢測符合率（符合率=（真陽性+真陰性）/總樣本數(shù)×100%）。

2、重復(fù)性：選取高、中、低3個(gè)濃度水平的質(zhì)控樣本（各10份），分別進(jìn)行批內(nèi)檢測（同批次重復(fù)檢測10次）和批間檢測（連續(xù)10天檢測），計(jì)算CV值（CV=標(biāo)準(zhǔn)差/均值×100%）。

3、穩(wěn)定性：連續(xù)30天檢測同一批質(zhì)控樣本（n=5），觀察博清生物酶標(biāo)儀A值的波動范圍，評估長期運(yùn)行穩(wěn)定性。

（五）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以x±s表示，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）準(zhǔn)確性分析

博清生物酶標(biāo)儀與對照儀器檢測4種自身抗體的A值均呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r均大于0.96，且兩種儀器的陽性判定結(jié)果與臨床診斷的符合率無顯著差異（P>0.05），其中抗dsDNA檢測符合率最高（98.1%），抗SSA檢測符合率最低（95.3%），但均滿足臨床科研需求。

（二）重復(fù)性分析

博清生物酶標(biāo)儀檢測4種自身抗體的批內(nèi)CV為2.8%~4.2%，批間CV為3.5%~5.0%，均顯著低于臨床允許的CV<10% 標(biāo)準(zhǔn)，且與對照儀器的CV值無顯著差異（P>0.05），表明其重復(fù)性良好。

（三）穩(wěn)定性分析

連續(xù)30天檢測結(jié)果顯示，博清生物酶標(biāo)儀檢測高、中、低濃度質(zhì)控樣本的A值波動范圍均小于5%，且無明顯漂移趨勢，表明其長期運(yùn)行穩(wěn)定性良好，可滿足連續(xù)科研實(shí)驗(yàn)需求。

三、討論

自身抗體檢測的可靠性是自身免疫病科研與臨床診斷的核心前提，而酶標(biāo)儀的性能是影響檢測結(jié)果的關(guān)鍵因素。本研究從準(zhǔn)確性、重復(fù)性、穩(wěn)定性三個(gè)核心維度，系統(tǒng)評估了博清生物酶標(biāo)儀在自身抗體檢測中的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)果表明該儀器可達(dá)到主流進(jìn)口儀器的檢測水平，具體優(yōu)勢體現(xiàn)在以下三方面：

（一）準(zhǔn)確性滿足科研與臨床需求

博清生物酶標(biāo)儀與進(jìn)口對照儀器的A值相關(guān)性系數(shù)均大于0.96，且與臨床診斷的符合率超過95%，這一結(jié)果得益于其采用的雙波長檢測技術(shù)——通過主波長檢測特異性信號，副波長（630nm）消除背景干擾（如血清濁度、孔壁污染），有效降低非特異性吸附帶來的誤差。此外，儀器的光學(xué)系統(tǒng)采用進(jìn)口光柵，波長精度達(dá)±1nm，可精準(zhǔn)匹配不同自身抗體ELISA試劑盒的推薦波長，進(jìn)一步保證檢測準(zhǔn)確性。

（二）重復(fù)性與穩(wěn)定性支撐實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性

科研實(shí)驗(yàn)對數(shù)據(jù)的可重復(fù)性要求極高，本研究中博清生物酶標(biāo)儀的批內(nèi)CV<4.5%、批間 CV<5.0%，且30天連續(xù)檢測無明顯漂移，這與其高精度溫控系統(tǒng)密切相關(guān)。該儀器采用底部加熱方式，孵育溫度控制精度達(dá)±0.1℃，可避免因溫度不均導(dǎo)致的酶促反應(yīng)差異；同時(shí)，其8通道同步檢測設(shè)計(jì)可減少批次間操作誤差，為大樣本量科研實(shí)驗(yàn)（如自身抗體流行病學(xué)調(diào)查）提供穩(wěn)定的數(shù)據(jù)支撐。

（三）國產(chǎn)優(yōu)勢助力科研成本優(yōu)化

相較于進(jìn)口酶標(biāo)儀，博清生物酶標(biāo)儀在價(jià)格上具有顯著優(yōu)勢（約為進(jìn)口儀器的1/2~2/3），且耗材兼容性強(qiáng)，可適配國內(nèi)外主流ELISA試劑盒，無需依賴特定品牌耗材。此外，儀器配備的軟件支持?jǐn)?shù)據(jù)自動導(dǎo)出、批量樣本分析及質(zhì)控圖生成，可簡化科研數(shù)據(jù)處理流程，提高實(shí)驗(yàn)效率。

本研究仍存在一定局限性：首先，樣本來源僅為單一中心，未來需通過多中心研究進(jìn)一步驗(yàn)證儀器的普適性；其次，本研究僅評估了4種常見自身抗體，后續(xù)可擴(kuò)展至抗核小體抗體（AnuA）、抗磷脂抗體（aPL）等更多靶點(diǎn)，全面覆蓋自身免疫病檢測需求。博清生物博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標(biāo)儀在自身抗體檢測中表現(xiàn)出良好的準(zhǔn)確性、重復(fù)性及穩(wěn)定性，與主流進(jìn)口酶標(biāo)儀性能一致，且在成本控制與操作便捷性上具有顯著優(yōu)勢。該儀器可滿足自身免疫病相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)及臨床檢測需求，為國產(chǎn)酶標(biāo)儀在自身抗體檢測領(lǐng)域的應(yīng)用提供了可靠證據(jù)，也為科研機(jī)構(gòu)降低設(shè)備成本、提升實(shí)驗(yàn)效率提供了新選擇。